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生物通首頁 > 今日動態 > 專題總匯 > 2016版流式細胞儀選購指南


       對于單個細胞及其他生物粒子的分析,流式細胞術已經成為一種不可或缺的方法。它讓研究人員能夠在單細胞水平高效地鑒定關鍵的標志物,如小分子、核酸以及肽段和蛋白。如今,儀器和試劑的創新為研究人員帶來了更多的選擇。如何選擇一臺適合的儀器?在選購中要注意些什么?趕快來看看吧。




選購指南

市場上有各種類型的流式細胞儀,從經典的臺式儀器到當下熱門的便攜式設備,可輕松帶出實驗室。所有儀器都有三個基本組件:流體系統、光學/檢測系統以及分析系統。在此,我們回顧一下這些部件的基本特征,方便你選購下一臺儀器。


      流體系統:


在流式分析中,細胞或顆粒溶液被聚焦成一束,以一定速度從流動室噴嘴中噴出。常見的聚焦機制是流體力學聚焦,其中細胞溶液被鞘液包裹和推動。通過調整鞘液的速度,你可以調整直徑,從而調整單細胞懸液的通量;鞘液速度快,意味著細胞束窄,增加了每次只有一個細胞通過檢測器的可能性。對于高通量藥物篩選或T細胞免疫分型,這很有用。

聲波聚焦是替代流體力學聚焦的另一種方法,它利用超聲波將細胞置于單個聚焦線上。聲波聚焦有助于確保每次只有一個細胞通過,同時維持比較高的通量。這種技術在尋找稀有細胞時特別有用,比如尋找血液中的循環腫瘤細胞(CTC)。賽默飛世爾的Attune NxT儀器就使用了這種聲波聚焦技術。【詳細

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      光學系統:


在許多流式系統中,光的散射以兩種方式被監控。前向散射光(FSC)帶來細胞大小或表面積的信息。較小的細胞折射較少的光,而較大的細胞折射較多的光。第二種是側向散射光(SSC),它提供了細胞復雜度的信息或內部結構的檢測。綜合這兩個測量結果,研究人員可確定多個參數和功能,從而區分不同的細胞類型。

光散射模式只是提供了細胞的物理信息。若要拷問細胞的分子特征(如基因表達、蛋白定位或細胞周期的狀態),細胞必須經過某種方式的標記。這通常使用熒光染料或熒光標記的抗體或納米顆粒來實現的。染料、抗體和納米顆粒的選擇在很大程度上取決于應用和目標。【詳細

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      高級功能:


近年來,市場上也涌現出一些新穎的流式細胞儀,如成像流式細胞儀(默克的ImageStreamX MarkII平臺)。這些儀器不僅能提供熒光標記的強度信息,還能提供這些標記在細胞內的精確定位。對那些監控蛋白轉位或細胞信號的實驗而言,這特別有用。

其他一些技術也正與流式細胞技術相融合。質譜流式細胞技術的核心就是:流式細胞技術與質譜技術。對于Fluidigm的質譜流式細胞技術CyTOF(Cytometry by Time-Of-Flight),其原理簡單來說是利用質譜原理對單細胞進行多參數檢測的流式技術,既繼承了傳統流式細胞儀的高速分析的特點,又具有質譜檢測的高分辨能力。

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      細胞分選:


在鑒定細胞或顆粒之后,我們通常需要進一步的分析,利用新一代測序(NGS)或數字PCR(dPCR)這樣的技術,或者培養細胞,用于治療等目的。這時,流式細胞儀的分選功能就顯得很重要。

流式細胞儀通常每秒形成1萬至10萬個液滴。事件檢測和液滴形成之間的精確距離被稱為液滴延遲。這是一個關鍵參數,可確保收集的液滴攜帶了觸發事件的細胞。之前,液滴延遲的測定是一個費力的過程,需要多年的訓練。不過最近,這個過程已在一些儀器(如Bio-Rad的S3e和BD Biosciences的FACSAria Fusion)上自動化。【詳細

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