Science技術指南:Western Blot新品新技術

【字體: 時間:2013年03月05日 來源:生物通

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  自1981年W. Neal Burnette將這種蛋白印跡技術正式命名為“Western Blot”以來,Western Blot已經走過了三十二個春秋了,對于這種用于鑒別特殊蛋白質的技術方法,目前已經涌現出了許多新產品,新技術,用以改善其可重復性,靈敏性,可測性,以及實驗速度。為此Science雜志以此為主題,推出了最新一期的技術專題。

  

生物通報道:自1981年W. Neal Burnette將這種蛋白印跡技術正式命名為“Western Blot”以來,Western Blot已經走過了三十二個春秋了,對于這種用于鑒別特殊蛋白質的技術方法,目前已經涌現出了許多新產品,新技術,用以改善其可重復性,靈敏性,可測性,以及實驗速度。為此Science雜志以此為主題,推出了最新一期的技術專題。

工作原理

簡單而言,Western blot就是通過凝膠電泳,分離不同大小的蛋白,然后進行轉膜(通常是硝化纖維素或PVDF),將濾紙和膜浸泡在緩沖溶液中的方法稱為濕轉。此后又發展出了干轉和半干轉移,這兩種方法比傳統的濕轉方法更快,也更規整,但是對于高質量的蛋白而言,效率更低。

對于半干轉印方法來說,膜和凝膠被放置在緩沖液浸泡的濾紙之間,加上陽極和陰極,電流就能驅動蛋白轉移到膜傻瓜。三種方法中,干法轉膜最快,但轉印效率也最低。

轉膜結束后,進行封閉,再上一抗二抗,進行檢測。檢測方法通常是化學發光或者熒光方法,前者是通過酶光化學反應,成像設備檢測結果,而后者則是通過帶有熒光基團的抗體探針進行檢測。熒光檢測方法的主要優勢在于可以同時檢測多個蛋白,并且其信號更一致,因此也更有利于量化研究。

目前不少公司都推出了相關設備,軟件和消耗品,令Western Blot實驗更加簡單,更加有效,同時還在實驗中加入了一些驗證點,從而研究人員能隨時監測實驗發展,甚至修改實驗步驟。

如何加速免疫檢測過程

在整個Western Blot實驗過程中,轉膜,封閉,抗體孵育,洗滌等步驟占據了一大半的時間,因此不少公司圍繞這些方法進行了優化。比如EMD Millipore公司推出的SNAP i.d. 2.0系統,就能通過真空驅動技術和內置分流槽,加速轉膜過程,而不僅僅是依賴于擴散作用。這一系統能將轉膜的四個小時,縮短到30分鐘,其Western blotting 產品部經理Michele Hatler表示,“我們確實改善了estern blotting實驗進程中的工作效率。各種步驟都是按照傳統的方法進行,我們只是加了一個真空。”

最新的2.0版本,是2012年9月推出的,相比于其之前的版本進行了幾個方面的改進,比如擴展了應用范圍,現在能用于中等大小的凝膠(8.5 cm*13.5 cm)和小型凝膠(7.5 cm*8.4 cm),以前則只能用于小型凝膠。

“這一設備很便宜,操作也很簡單,而且切實提高了實驗效率,節約了時間”,Hatler說。(SNAP i.d. 2.0系統更詳細資料>> >>

此外Bio-Rad也推出了一種稱為Trans-Blot Turbo的蛋白轉移系統,其關鍵技術點在于其新配方轉印緩沖液,以及一種特殊材質的濾紙,這樣就能增加電流,使轉印更快(推薦使用集成電源),這一系統最快能在三分鐘內完成蛋白印跡實驗,而典型的半干轉印方法通常需要15-60分鐘,才能完成一次完成的印跡,并且對于高分子量蛋白而言,結果并不是十分理想。(Trans-Blot Turbo系統更詳細資料>> >>

 

 

后續文章:增加檢測點,更好的定量,重塑WB等……

原文摘選:

LIFE SCIENCE TECHNOLOGIES
Not Your PI's Western Blot
More than three decades after its invention, the Western blot remains a crucial tool for investigators who need to reliably identify specific proteins. A host of recently released products use a variety of approaches to improve the reproducibility, sensitivity, quantifiability, and speed of Western blot experiments.

 

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