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Western blot抗體選購有講究[心得點評]

【字體: 時間:2015年07月02日 來源:生物通

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  抗體毀了你的western blot實驗?親,你并不是孤單的一個人。有時,你會發現新一批次的抗體無法再現之前的結果。有時,你甚至發現抗體根本不能與目標蛋白結合。錢花了不說,時間也一去不復返。如何選擇適當的WB抗體,讓Bio-Rad的專家來教你幾招。

抗體毀了你的western blot實驗?親,你并不是孤單的一個人。有時,你會發現新一批次的抗體無法再現之前的結果。有時,你甚至發現抗體根本不能與目標蛋白結合。錢花了不說,時間也一去不復返。如何選擇適當的WB抗體,讓Bio-Rad的專家來教你幾招。

1. 根據應用來購買

抗體是一個通用的工具,但它們本身也有局限性。有些抗體無法結合變性的蛋白,這就讓它在western blot中表現很糟。你要購買的產品最好是經過western blotting的驗證,有數據做支持。如果只有幾篇文獻,那要小心,因為它通常只顯示了目的條帶,而不清楚是否有非特異的條帶。

2. 查看所有的數據

供應商的網站通常列出了抗體的應用以及引用的文獻,你應該一篇一篇地去看。如果在選購時參考的數據不多,那么實驗可能會有風險。

3. 并非所有驗證都相同

一些供應商會明明白白地告訴你它們如何驗證抗體。為了節約時間和成本,許多公司并沒有驗證每一批的抗體,因此批次之間可能存在相當大的差異。有些公司在驗證中使用過表達的蛋白來證明抗體能夠與目的蛋白結合。由此產生的數據并不能很好地說明抗體在western blot中表現如何?贵w若是經過全細胞裂解液以及各種樣品的檢驗,每一批都是如此,那么就值得購買。

4. 使用第三方資源

一些機構,如CiteAb,提供了抗體引用的數據庫。而另一些自己開展檢測,并公開他們的數據。不過,盡管他們綜合了大量的數據,但這往往來自單一來源,通常是二手的。因此,你需要檢查這些信息是否與供應商網站上的一手數據一致。

5. 看看有沒有試用裝

許多公司現在提供小包裝的抗體,讓你大膽嘗試,再決定是否購買大包裝。這可是個好機會,既能驗證抗體是否適合你的實驗,又不用擔心浪費太多錢。

6. 做好優化的準備

供應商的驗證并不能完全取代內部的檢驗。你的樣品不同,操作步驟也不完全相同。而這些因素都會影響抗體的表現,因此需要將你的western blot與抗體的驗證分開而論。你的研究,最終還是需要你來把關。

7. 最終原則

無論你是采購還是使用抗體,你都必須記住抗體技術存在缺陷,它們可能會有變化。在選擇抗體時需要嚴謹。盡可能使用陽性和陰性對照,控制你自己的偏見,確保你的western blot能提供正確的答案。(生物通 薄荷)

了解Bio-Rad經過驗證的western blot抗體

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