Nature Methods:抗體質量的金標

【字體: 時間:2015年07月30日 來源:生物通

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  幾乎所有實驗室都會用到抗體,抗體不僅是生命科學研究的重要工具,在免疫學診斷領域也是不可或缺的。市面上的抗體種類繁多同時也良莠不齊,由于缺乏評估抗體質量的標準方法,人們過去只能依賴于生產廠家的信用。

  

生物通報道:幾乎所有實驗室都會用到抗體,抗體不僅是生命科學研究的重要工具,在免疫學診斷領域也是不可或缺的。市面上的抗體種類繁多同時也良莠不齊,由于缺乏評估抗體質量的標準方法,人們過去只能依賴于生產廠家的信用。

做過免疫熒光、免疫沉淀(IP)或者Western blot實驗的人都知道,抗體優劣對實驗結果有很大的影響。我們買到的抗體往往附有一份檢驗報告和一張western blot圖,除此之外并沒有什么額外的信息。而且某個實驗室用得好好的抗體,在別處可能并不好用。

魚龍混雜的抗體為生物學研究帶來了許多不確定因素。為此,科學家們建立了一個評估抗體質量的通用標準。這項工作由六個研究團隊共同完成,相關論文發表在近日的Nature Methods雜志上。

“過去人們難以判斷一個抗體是否正常工作,因為這類實驗往往耗時長而且成本高,”多倫多大學的Aled Edwards說!拔艺J為,缺乏抗體驗證是一個嚴重的科研問題!保ㄑ由扉喿x:專家經驗談:抗體制備法的利與弊

研究人員為人們提供了一個以質譜為基礎的標準操作步驟。他們通過這一方法評估了免疫沉淀抗體的質量,在1124個重組抗體中鑒定出了“IP金標抗體”。隨后,一些“金標抗體”、表現沒有那么好的“不確定抗體”和不起作用的抗體被送往其它研究團隊進行驗證。

絕大多數金標抗體在其它團隊手中也表現出了很高的性能,有著很好的可重復性。研究人員還通過免疫熒光、Western blot和染色質免疫沉淀(ChIP)對這些抗體進行了測試?偟膩碚f,IP金標抗體在免疫熒光和ChIP中也很好用,不過并不一定適合Western blot。研究人員指出,這是因為這些抗體選擇性結合折疊的蛋白。

IP-MS能夠給出定量的結果,”Edwards指出,人們可以利用這些定量數據,建立一個抗體質量的公共平臺,幫助科學家們找到最符合自己需要的抗體。

 

生物通編輯:葉予

生物通推薦原文:Marcon, E. et al. Assessment of a method to characterize antibody selectivity and specificity for use in immunoprecipitation. Nat Methods. 2015 Jun 29. doi: 10.1038/nmeth.3472.

 

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